药物医治的前提是它们与细胞靶点的物理结合。这种结合的测定往往是在体表进行

，无法充分仿照细胞内的复杂环境。Promega的科学家近日开发出一种新步骤

，可直接评估活细胞内靶点作用的动态过程。这项成就于近日颁发在《Nature Communications》期刊上。

阐释幼分子调节剂若何与细胞内的靶点结合

，对相识药理机造极度关键。除了靶点作用（target engagement）的特异性和亲和力

，非平衡前提的结合动力学也决定了候选药物的医治潜力。这些参数通常是通过生化步骤来评估的

，但无法充分仿照细胞内的复杂性。出于这个原因

，造药行业一向但愿在齐全细胞内评估靶点作用。

Promega的科学家利用NanoLuc技术开发出一种新步骤

，可测定活细胞中的靶点停顿（target residence）

，作为靶点作用的沉要方面。这种技术利用生物发光共振能量转移（BRET）

，允许实时测定活细胞内药物与蛋白靶点的结合。

为了检测药物-靶点的相互作用

，NanoBRET技术选取细胞通透性的荧光示踪剂

，旨在与NanoLuc象征的蛋白靶点相互作用。这种相互作用的了局是NanoLuc蛋白的能量转移到示踪剂上

，产生一种可丈量的信号。
若是幼分子候选药物与蛋白靶点相互作用

，示踪剂就必要和药物竞争

，这样BRET信号减弱。药物停顿功夫的测定依赖于化合物的预平衡、过量化合物的去除

，以及示踪剂的增长。实时信号监测显示

，缓慢解离的化合物故障示踪剂的结合

，使得BRET信号缓慢产生。

直接测定靶点作用

在药物开发过程中

，测定细胞中蛋白靶点与药物的结归并将这种靶点作用与药理作用有关联是极度沉要的。NanoBRET技术为直接评估靶点作用提供了一种单一的步骤。英国癌症钻研中心曼彻斯特学院的Graeme Walker暗示：“NanoBRET系统让我可能在活细胞中直接测定抑造剂的作用

，我很等待将这种技术利用到其他靶点。”

测定靶点停顿功夫

NanoBRET技术一个更大的益处在于可能测定靶点停顿功夫

，这是药物与蛋白相互作用的持续功夫。这让钻研人员可能优化药物

，以便加强作用。Walker补充说：“NanoBRET技术在维持细胞齐全的同时

，选取一种单一的步骤来测定化合物的停顿功夫。这种能力让我们团队可能阐释探针的新作用机造。”

NanoBRET技术是对BRET的大幅改进。它使用NanoLuc? 萤光素酶作为能量供体

，而HaloTag? 蛋白象征的NanoBRET? 618荧光基团作为能量受体

，出格适合细胞水平蛋白相互作用的钻研。