一、技术简介

BiFC是由Hu等在2002年最先报路的一种直观、急剧地判断指标蛋白在活细胞中的定位和相互作用的新技术
。

JDB电子成立和美满了PROTAC生物筛选与测试平台，JDB电子生物部拥有成熟的PROTAC职能检测及验证技术，利用融合蛋白表白及双荧光分子互补（BiFC)等技术，成立了高通量PROTAC 筛选平台，用以筛选靶向降解致病蛋白的PROTAC幼分子
。

有报路在GFP的两个β片层之间的环结构（loop）上有很多特异位点能够插入表源蛋白而不影响GFP的荧光活性，BiFC技术正是利用该荧光蛋白家族的这一个性，将荧光蛋白宰割成两个不拥有荧光活性的分子片段，再别离与指标蛋白衔接
。若是两个指标蛋白由于有相互作用而靠近，就使得荧光蛋白的两个分子片段在空间上相互靠近，沉新形成活性的荧光基因而发出荧光
。在荧鲜明微镜下，就能直接观察到两指标蛋白是否拥有相互作用，并且在最靠近活细胞生理状态的前提下观察到其相互作用产生的功夫、地位、强弱、所形成蛋白复合物的不变性，以及细胞信号分子对其相互作用的影响等，这些信息对钻研蛋白质相互作用有沉要意思
。

其后发展出的多色荧光互补技(multicolor BiFC)，不仅能同时检测到多种蛋白质复合体的形成，还可能对分歧蛋白质间产生相互作用的强弱进行比力.这项技术不必要特殊的设备，相互作用的蛋白也不必要出格的理论配比
。因而，BiFC技术已被国际上多多尝试室选取，在活细胞内证明蛋白质的相互作用
。本尝试室成功利用该技术钻研转录因子c-Jun、ATF2和c-Fos在原代神经元中的竞争性相互作用
。

BiFC技术以下几个特点使其对于钻研蛋白质相互作器拥有怪异的优势：

1、能在显微镜下直接观察到蛋白相互作用并且不依赖于其它次级效应；2、该相互作用能够在活细胞中进行观察，排除了由于细胞裂解或固定可能带来的假阳性了局；3、蛋白质在近似生理前提的环境下表白，表白水平及个性如翻译后建饰极大地靠近于内源蛋白；4、不必要蛋白质有出格的理论配比，能检测到分歧亚群蛋白质间的相互作用；5、多色BiFC技术不仅能同时检测到多种蛋白质复合体的形成，还可能对分歧蛋白质间产生相互作用的强弱进行比力；6、BiFC技术除了荧光颠倒显微镜表，不要求特殊的设备
。

尝试单一、快捷、直观，并合用于原核、真菌、植物、动物等多种组织、细胞. 该技术的美满与发展必然会为蛋白质组学、蛋白质相互作用连锁图的成立带来福音. 但是，该技术与大多检测蛋白质相互作用的技术一样，也存在着假阴性和假阳性的问题，必要在尝试中仔细验证
。

二、尝试步骤

1. 将主张基因插入到含有N片段或C片段的载体中，构建成融合蛋白表白载体

2. 转染细胞，荧鲜明微镜下观察是否有相互作用
。

三、利用事俘

Fig1: Potassium deprivation increases BiFC signals formed by JunVN173 and ATF2VC155. CGNs were transfected with plasmids encoding JunVN173 (JunVN) and ATF2VC155 (ATF2VC) together with ECFP. JunΔL3VN were served as a control. After 16 hr, CGNs were switched to 25K, 5K media for 1h. Photos were taken on a fluorescence microscope at a magnification of 200×. The white arrows indicated the BiFC signals (Venus fluorescence). The transfected cells were lysed for Western blotting by anti-Flag and anti-ATF2 (20F1 CST). CFP were reprobed for normalizing the tranfection efficiency. The percentage of CFP-positive cells exhibiting Venus fluorescence was scored. Data were presented as means ± S.E., n=3, Student’s t test, p<0.05.