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ADC药物结构复杂多样化，以及体内作用和代谢过程复杂性，这些为CMC钻延注临床前钻研等带来多沉挑战。分歧的肿瘤微环境分歧，靶蛋白分歧，对于ADC药物来说选用何种抗体、幼分子毒素、衔接子、衔接方式等都必要进行特异性思考。泛偶联时期，每一款偶联药物，都应该结合自身特点找准定位，形成差距化竞争战术，走创新化的研发之路，满足未被满足的临床需要。
ADC是由抗体+衔接子+幼分子毒素三部门组成的复杂结构，这决定了它的造备工艺也会更为复杂。在造备和出产过程中，必要经历多个合成步骤，溶于多种溶剂，幼分子毒素必要在这些过程中维持化学结构和性质不变。ADC药物的成功通常取决于以下五大身分的设计：
靶向抗原的选择是ADC药物设计的关键一环。需满足：
1、特异性，肿瘤细胞高表白、正常细胞低表白或不表白；
2、靶向抗原需为肿瘤细胞表表抗原；
3、高效诱导内涵化过程（internalization）等。
理论上ADC药物可在肿瘤细胞表开释毒素，不经过细胞内涵化，通过“旁观者效应”对肿瘤细胞造成杀伤。但现实上目前大部门ADC药物疗效的实现均是以内涵化后的药物开释为基础。因而，ADC药物中的抗体和肿瘤细胞表表抗原结合后，ADC-抗原复合物需能有效诱导内涵化过程，进入肿瘤细胞内，并通过适当的细胞内转运和降解过程，实现幼分子药物的有效开释。
通过细胞免疫荧光Confocal检测ADC内涵化
ADC药物中的抗体必要：
1、对所选抗原拥有高度特异性。若不足特异性可能会造成脱靶毒性或被过早断根；
2、与靶向抗原的高亲和力；
3、低免疫原性，从而保障ADC药物在血液中有较长循环功夫以及顺利进入肿瘤细胞。
衔接子蕴含不成裂解 （non-cleavable） 衔接子和可裂解 （cleavable）衔接子两种类型。衔接子必要思考不变性和开释效能的平衡。不成裂解衔接子更具不变性优势，可裂解衔接子开释效能更高。
偶联技术通过衔接子将抗体和幼分子毒素衔接到一路，涉及化学反映、抗体建饰与刷新等有关技术。ADC药物所选取的偶联技术与其最终的药物抗体比率（Drug to Antibody Ratio；DAR）亲昵有关，而DAR的数值及其散布会显著影响ADC药物性质。DAR过大可能导致ADC药物荟萃，进而在循环系统中被断根；DAR过幼，可能导致ADC药物无法达到最佳医治成效。DAR在2~4之间是ADC药物的最优选。目前，常用的偶联技术可分为随机偶联和定点偶联两大类。DS-8201选取定点偶联技术，药物抗体比高达8，拥有更好疗效。
幼分子毒素是ADC药物阐扬杀伤活性的重要成分。在选择幼分子毒素时需综合思考毒性、可建饰性等多个成分：1，与通常化药相比，拥有更高毒性；2、可建饰性；3、适当的亲疏水平衡；4、高不变性等。
ADC药物进入血液后，其抗体部门鉴别并结合靶细胞的表表抗原；随后ADC抗原复合物由内吞通路介导进入细胞。在细胞内，可裂解衔接子对肿瘤细胞内的微环境敏感，会受 pH 值影响，或者被蛋白酶及某些化学物质裂解；携带不成裂解衔接子的 ADC 药物被溶酶体消化，从而开释药物。某些 ADC 药物的幼分子能够穿透细胞膜进一步杀伤周围的肿瘤细胞，即旁观者杀伤效应。此表，ADC 还具备 ADCC、CDC等抗体的免疫效应。
ADCC（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity）是一种抗体依赖的细胞毒性作用，是免疫系统匹敌病毒习染及肿瘤疾病的一种沉要免疫防御机造。通常为天然杀伤细胞（NK）介导（有时中性粒细胞和嗜酸性粒细胞也能介导ADCC作用），抗体Fab端结合靶细胞表表抗原，Fc端结合NK细胞表表的Fc受体CD16，将靶细胞与NK细胞拉近距离，并激活NK细胞开释颗粒酶和穿孔素等，最终导致靶细胞被裂解。
CDC（complement dependent cytotoxicity）是一种补体依赖的细胞毒性作用，由血清中大量存在的一系列补体蛋白 (C1-C9) 介导。C1q 与细胞表表抗体分子的 Fc 结构域结合而触发CDC反映。补体通过特异性抗体与细胞膜表表相应抗原结合，激活补体经典蹊径，形成的攻膜复合物裂解靶细胞的作用。很多抗肿瘤抗体，如针对 CD20、CD52、人白细胞抗原 (HLA)-II 类、癌胚抗原 (CEA)、糖脂抗原等产生的抗体可诱导 CDC反映。
ADCC和CDC作用机造[1]
钻研发现，双靶点 ADC 比两种单靶点ADC结合给药拥有更好的医治成效。双靶点 ADC 大局在医治难治性乳腺癌和其他肿瘤方面极度拥有潜力。好比，由Sutro Biopharma和EMD Serono共同开发的M1231是一款靶向EGFR和MUC1的双特异性抗体ADC。M1231通过可裂解的Val-Cit SUTRO链接子与Hemiasterlin细胞毒素相连。Hemiasterlin 是一种三肽，通过与微管蛋白结合阐扬其细胞毒性，从而粉碎正常的微管动力学。
再好比，下文中科研人员通过设计带有叠氮化物和甲基四嗪基团的新支链衔接子作为正交点击反映位点。加上有效载荷？椋ㄔ毯魑慊鞫缘 DBCO 或 TCO、PEGn、GluValCit 可裂解接接子、PABC 基团和毒素分子 MMAE 或 MMAF）。合成了拥有双效载荷的均质 ADC。GluValCit 衔接子系统确保了 ADC 在体内的功效，同时最大限度地降低了动物血浆中衔接子的过早降解。选择 MMAE 和 MMAF 的双沉偶联物使 ADC 可能靶向作用于多种乳腺癌细胞。
双靶点ADC分子设计和偶联战术[2]
ADC 药物通过抑造肿瘤DNA复造或阻滞细胞周期诱导肿瘤细胞殒命。ADC药物进入血液循环后，与肿瘤细胞表表靶向抗原受体结合，形成ADC抗原复合物，被肿瘤细胞内吞，进而经过溶酶体降解，细胞毒素在胞内开释，结合至DNA幼沟或微管蛋白，抑造肿瘤DNA复造或阻滞细胞周期，诱导肿瘤细胞殒命。疏水性幼分子毒素还能够通过细胞膜扩散，对邻近肿瘤细胞产生杀伤活性，称为旁观者效应。
ADC药物的旁观者效应示意图[3]
SYD985 和 T-DM1 都是靶向HER2 的ADC药物，SYD985 因其更强的旁观者效应而在细胞毒性测定中更有效。KRCH31 细胞是 HER2 阳性，ARK-4 细胞是 HER2 阴性，两种细胞系进行共造就（用染料象征），而后进一步进行 FACS 分析细胞殒命。数据显示，SYD985会导致旁观者细胞（ARK-4）的杀伤。如下图所示，当使用SYD985处置 KRCH31 细胞与 ARK-4 共造就时，KRCH31 的杀伤力没有增长，但 KRCH31/ARK-4 的共造就使HER2 低/不表白的 ARK-4 细胞的旁观者效应显著加强。当使用 T-DM1处置 KRCH31/ARK-4 共造就物96 时，检测到最低水平的旁观者细胞毒性。
体表旁观者效应[4]
JDB电子生物团队占有200多肿瘤癌细胞系，多种可供选择的ADC靶蛋白表白阳性和阴性的肿瘤细胞。此表，JDB电子生物团队占有丰硕的细胞象征经验及基于 FACS 的细胞活力分析能力。
蕴含4部门：
1、抗体；
2、载药-衔接子中央体；
3、ADC原料药；
4、造剂部门。
此表还必要引入一些特殊的质量节造指标。如药物与抗体的比率，载药与抗体的衔接位点以及ADC药物中的药物负载散布等。此表，ADC中游离的载药和抗体必要进行量化节造，载药衔接抗体后匹敌体和靶点结合效力的影响以及ADC在人体血浆中的不变性也必要进行钻研。
通常情况，整体ADC的毒性钻研可在一种动物种属中进行钻研。同时必要思考其中幼分子化合物和抗体药物的双沉属性。若是幼分子化合物为新化合物或者毒性特点不明确，则至少必要在一个有关动物种属中对其毒性进行单独调查，能够单独发展试验，也能够在ADC的毒性钻研中设置单独给药组。若是幼分子化合物为已上市药物，无需对其毒性进行单独钻研。若抗体部门靶向全新的靶点或者拥有特殊安全性忧郁时，应试虑选取转基因动物或代替分子匹敌体的靶向药理作用、Fc效应，以及靶向开释幼分子化合物所带来的潜在毒性反映进行钻研。JDB电子可援手客户实现：ADC药物的血浆不变性及体表溶血试验、药效学钻延注药代动力学、毒性钻延注及安全性评价等全套钻研。
JDB电子在ADC的临床前一体化钻研规划造订中与客户深刻互换，科研骨干将每一个案例的特点与多年实战经验和技术堆集相结合，审慎地将优质尝试规划与了局提交到客户手上。截至目前，JDB电子承接的IND申报类生物药大项目已经100多项；蕴含单抗、双抗、多抗、ADC、病毒疫苗和融合蛋白等。截至2022年5月，JDB电子已成功助力10个ADC药物获批临床，并有多个ADC项目在研。JDB电子已实现毒素幼分子：DM1，MMAE、Exatecan、Dxd，SN38等。JDB电子已实现靶点：Her2、Her3、Trop2、Claudin 18.2、CD33、Muc1、FR等。
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