幼核酸药物递送技术发展过程

第一代：LNP+幼核酸→肝脏：

将幼核酸药物包裹在脂质纳米颗粒（LNP）中
，使被包裹的幼核酸药物免于降解和断根
，并推进其跨细胞膜运输到指标靶位
。LNP通过肝细胞表表低密度脂蛋白受体鉴别和摄取
，合用于医治肝脏有关的疾病
。

第二代：GalNAc+幼核酸→肝脏：

N-乙酰半乳糖胺（GalNAc）通过与寡核苷酸共价衔接
，其内吞递送依赖肝细胞ASGPR介导的受体循环
。进入内体后的酸化环境推进受体–配体解离
，从而开释寡核苷酸药物
。ASGPR在内体酸化后急剧回收至细胞表表
，可反复参加配体结合
，从而实现高效、可沉复的肝摄取
。

新一代：抗体+linker+幼核酸（即AOC)：

AOC的结构与ADC类似
，重要由三部门组成：阐扬组织靶向作用的载体
，linker
，作为payload的幼核酸
。AOC将抗体和幼核酸有效地结合在一路
，以实现靶向医治
，能够削减医治疾病所需的药物量
，同时解决不成靶向和幼核酸药物的递送问题
。与传统的幼核酸疗法相比
，AOC拥有更好的药代动力学个性和更具特异性的生物散布
。

AOC药物偶联技术道理

幼核酸药物由于其化学结构可建饰性强
，可通过多种步骤与抗体进行偶联
。以下为造备AOC的四种常用步骤：

离子相互作用（电荷相互作用）

寡核苷酸主链带负电荷
，鱼精蛋白带正电荷
。将抗体或抗体片段（Fab或scFv）与鱼精蛋白构建成融合蛋白
，通过鱼精蛋白的正电荷偶联带负电荷的寡核苷酸
，形成抗体偶联寡核苷酸（antibody-oligonucleotide conjugates）
。

利益：单一
，矫捷；且寡核苷酸进入细胞
，多阳离子复合物可充任溶酶体逃逸剂
。在溶酶体中
，多阳离子复合物充任质子海绵
，氯离子在内部扩散以赔偿电荷不平衡
，导致渗入膨胀
，形成泄漏膜
。这种溶酶体逃逸很沉要
，由于寡核苷酸没有强的膜通透性
。

弊端：离子相互作用是可逆的、不不变的；且难以确定DAR值
。且鱼精蛋白的免疫原性较高
，容易引发不良反映
。

亲和性衔接

通过Avidin/Streptavidin?Biotin偶联：将硫醇建饰的DNA化学衔接到马来酰亚胺激活的链霉亲和素上
，天生链霉亲和素-DNA
，进一步与各类生物素化蛋白非共价衔接
。重要利用于免疫检测步骤开发
。进一步发展
，直接利用链霉亲和素的四个生物素结合位点
，将生物素化的抗体和生物素化的寡核苷酸直接相连
。

利益：操作过程相对简易、前提和善
。

弊端：难以节造DAR值
，血浆内不不变
。

直接衔接（直接偶联）

直接偶联是指在寡核苷酸上预先引入可反映基团
，再与抗体的赖氨酸、半胱氨酸或工程化位点形成共价衔接
，是最靠近ADC化学系统的AOC构建方式
。为了不影响作用机造
，建饰通常置于siRNA的sense strand
。

优势：结构均一、化学不变性高
，并与寂仔ADC工艺系统高度兼容
。Linker体积幼、匹敌体影响有限
，可结合定点偶联实现精确节造DAR
，使纯化、分析和放大出产更为可控
。

局限：寡核苷酸自身对化学环境敏感
，因而对linker的设计、建饰地位以及与双链退火过程的兼容性要求更高
。直接偶联战术固然可获得高度均质的AOC
，但对化学建饰的精准杜纂序列工程提出更严格的前提
。”

核酸双链杂交结合

先将一条单链寡核苷酸以共价方式衔接至抗体
，再通过与其互补链的杂交形成双链结构
，从而获得AOC
。这种步骤利用了核酸天然的碱基配对个性
，使偶联过程无需直接在抗体上构建齐全双链
。

优势：对某些含有特殊结构或复杂化学建饰的核酸而言
，杂交方式往往比直接偶联更易获得更高的造备产率与更和善的反映前提
。由于只需在单链上引入可衔接基团
，互补链可通过杂交急剧、定向地组装
，大大削减了化学建饰对寡核苷酸自身构象与不变性的影响
，也为造备较长或结构敏感型寡核苷酸提供了更大的工艺弹性
。

局限：双链长杜纂序列需精确优化：过短会导致杂交不不变、影响最终AOC均一性；过长则可能产生二级结构
，降低杂交效能
。此表
，该步骤在放大出产时对杂交前提、双链比例和体内不变性的要求更高
，因而在实现高均一、高不变性的工业化工艺上仍需更精密的设计与节造
。

AOC的优势

将抗体药物的组织特异性优势与幼核酸的靶点特异性优势相结合
，解决目前幼核酸药物重要通过LNP、GalNAc递送系统靶向肝脏的问题
，因而具备辽阔的发展空间
。

优势可概况为：1、拥有靶向性
，增长生物利用度
，削减毒作用；2、提高不变性
，增长梦想半衰期
，提高有效性
。

推荐阅读：

参考文件

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